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色譜法的有關(guān)知識(shí)

更新時(shí)間:2016-08-22      點(diǎn)擊次數(shù):2865

       色譜法是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)領(lǐng)域的重要分析手段,在藥物分析中有著極為重要的地位,各國藥典都收載了許多藥物的色譜分析方法。《中華人民共和國藥典》2015年版也不例外:收載了上千個(gè)藥品用色譜法進(jìn)行純度檢查、定性鑒別或含量測定。

      色譜柱中固定不變的物質(zhì)是固定相,攜帶樣品向前流動(dòng)的是流動(dòng)相,色譜類型較多,從不同角度可以有不同的分類方法:

 色譜法分類:

1、按流動(dòng)相和固定相所處狀態(tài)分類:

     流動(dòng)相為氣體的稱為氣相色譜,流動(dòng)相為液體的稱為液相色譜。固定相為固體的可分為氣固色譜(GSC)或液固色譜(LSC),固定相為液體的有氣液色譜(GLC)或液液色譜(LLC)。

 2、按固定相的形態(tài)分類:可分為柱色譜法、平面色譜法,如,紙色譜法、薄層色譜法等。

 3、按分離過程的機(jī)制分類:可分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法和空間排阻色譜法等類型,后兩者只存在于 液相色譜中。

       另外,還有其他分離機(jī)制的色譜方法,如,毛細(xì)管電泳法,根據(jù)組分的電泳速度差異而實(shí)現(xiàn)分離。

 

色譜流出曲線與有關(guān)概念

 (一)色譜流出曲線和色譜峰:

 1、色譜流出曲線:在色譜分析中,樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器,所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線,稱為色譜流出曲線(elution profile),又稱色譜圖。

 2、基線:在操作條件下,沒有組分流出、僅有流動(dòng)相通過檢測器系統(tǒng)時(shí)所形成的流出曲線。穩(wěn)定的基線應(yīng)是一條平行于橫軸的直線。基線反映儀器(主要是檢測器)的噪聲隨時(shí)間的變化。

 3、色譜峰:流出曲線上的突起部分,正常的色譜峰為正態(tài)分布曲線,曲線有zui高點(diǎn),以此點(diǎn)的橫坐標(biāo)為中心,曲線對(duì)稱的向兩側(cè)快速、單調(diào)下降。

       一種組分的色譜峰可用峰高或峰面積(用于定量)、峰位(用保留值表示,用于定性)及峰寬(用于衡量柱效)說明。

 

(二)保留值:

1、保留時(shí)間(retention time):色譜圖橫軸上從進(jìn)樣開始到某個(gè)組分的色譜峰頂點(diǎn)的時(shí)間間隔為該組分的保留時(shí)間。

 2、死時(shí)間:不被固定相保留的組分,從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間間隔。

 3、調(diào)整保留時(shí)間:組分被固定相滯留的時(shí)間。

 4、保留體積:從進(jìn)樣開始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時(shí),所需通過色譜柱的流動(dòng)相體積,單位為mL。

 5、死體積:不被固定相保留的組分通過色譜柱所消耗的流動(dòng)相的體積。

 6、調(diào)整保留體積:保留體積減死體積。

 7、相對(duì)保留值:兩組分的調(diào)整保留值之比,也是色譜系統(tǒng)的選擇性指標(biāo)。

 

(三)色譜峰高和峰面積:

 1、峰高(peak height, h):色譜峰頂點(diǎn)至基線的距離。

 2、峰面積(peak area, A):色譜曲線與基線間包圍的面積。

 

(四)色譜峰區(qū)域?qū)挾龋?/span>

 1、標(biāo)準(zhǔn)差:正態(tài)色譜流出曲線上兩拐點(diǎn)間距離之半。

 2、半峰寬:峰高一半處的峰寬。

 3、峰寬:通過色譜峰兩拐點(diǎn)作切線在基線上所截得的距離。

 

(五)分離度:又稱分辨率或分辨度,它是色譜圖中相鄰兩峰分離程度的量度。

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